Исследование тмс по крови. Эпилепсия у детей - о

В течение многих лет скрининг в основном выполняли тестами , специфичными для каждого отдельного заболевания. Например, скрининг ФКУ был основан на микробиологической или химической оценке повышения фенилаланина.

Эта ситуация полностью изменилась за последнее десятилетие с появлением технологии тандемной масс-спектрометрии (ТМС). Анализ тандемной масс-спектрометрией (ТМС) может не только точно и быстро выявить повышенный фенилаланин в пятне крови у новорожденного с меньшим числом ложноположительных ответов по сравнению со старыми методами, но также одновременно позволяет обнаружить несколько десятков других биохимических нарушений.

Некоторые из них уже скринировали индивидуальными тестами . Например, многие государства использовали специфические тесты для выявления повышения метионина, чтобы обнаруживать Тандемный масс-спектрометрия (ТМС) оказалась также надежным методом не-онатального скрининга некоторых заболеваний, соответствующих критериям скрининга, но не имевших ранее надежного теста.

Например, недостаточность MCAD - заболевание окисления жирных кислот, обычно бессимптомное, но обнаруживаемое клинически, когда у пациента повышается катаболизм. Обнаружение недостаточности MCAD при рождении может оказаться жизненно важным, поскольку больные дети имеют очень высокий риск жизнеугрожающей гипогликемии в раннем детстве при катаболических состояниях, вызванных интер-куррентными заболеваниями, например вирусной инфекцией.

Почти четверть детей с недиагностированной недостаточностью MCAD умирают при первом же эпизоде . При правильном лечении метаболическое расстройство может быть купировано. При недостаточности MCAD первичная цель скрининга - предупреждение родителей и врачей о риске метаболической декомпенсации, так как дети между приступами практически здоровы и не нуждаются в ежедневном лечении, кроме исключения длительного голодания.

Тем не менее использование тандемной масс-спектрометрии (ТМС) для неонатального скрининга остается под вопросом. Помимо обеспечения быстрого тестирования многих нарушений, неонатальный скрининг при которых уже делается или может быть оправдан, тандемная масс-спектрометрия (ТМС) также выявляет новорожденных с врожденными ошибками метаболизма типа метилмалоновой ацидемии, обычно не входящих в программы скрининга из-за их редкости и трудности обеспечения окончательной терапией, предохраняющей от прогрессирующего неврологического ухудшения.

Заболевания, выявляемые при тандемной масс-спектрометрии

I. Аминоацидемии :
- ФКУ
- Болезнь мочи с запахом кленового сиропа
- Гомоцистинурия
- Цитруллинемия
- Аргининоянтарная ацидурия
- Тирозинемия I типа

II. Органические ацидемии :
- Пропионовая ацидемия
- Метилмалоновая ацидемия
- Изовалериановая ацидемия
- Изолированная 3-метил-кротонил-глицинемия
- Глутаровая ацидемия (тип I)
- Недостаточность митохондриальной ацетоацетил-коА-тиолазы
- Гидроксиметилглутаровая ацидемия
- Недостаточность множества коА-карбоксилаз

III. Нарушения окисления жирных кислот :
- Недостаточность SCAD
- Недостаточность гидрокси-SCAD
- Недостаточность MCAD
- Недостаточность VLCAD
- Недостаточность LCAD и недостаточность трифункционального белка
- Глутаровая ацидемия II типа
- Недостаточность карнитин-пальмитоилтрансферазы II

Тандемная масс-спектрометрия (ТМС) также может идентифицировать аномальные метаболиты с неопределенным значением для здоровья. Например, недостаточность SCAD - другое заболевание окисления жирных кислот, чаще всего бессимптомное, хотя некоторые пациенты могут иметь трудности, связанные с эпизодической гипогликемией. Таким образом, прогностическая ценность положительного результата анализа тандемной масс-спектрометрии (ТМС) для симптоматической SCAD, вероятно, будет очень низкой.

Перевешивает ли преимущество обнаружения недостаточности SCAD отрицательное влияние теста, вызывающее неоправданное беспокойство родителей, для большинства новорожденных с положительным результатом теста, так никогда и не проявивших клинических симптомов? Таким образом, не каждое заболевание, обнаруживаемое методом тандемной масс-спектрометрии (ТМС), соответствует критериям для неонатального скрининга.

Именно поэтому некоторые эксперты в системе здравоохранения доказывают, что родителям и врачам нужно сообщать только об отклонениях в метаболитах с доказанной клинической пользой. Другие отстаивают использование всей информации, предоставляемой тандемной масс-спектрометрией (ТМС), и предлагают сообщать родителям и врачам обо всех аномальных метаболитах, независимо от того, насколько хорошо заболевание соответствует стандартным критериям неонатального скрининга. В дальнейшем можно тщательно наблюдать за пациентами с аномалиями неизвестного значения. По всем этим причинам использование тандемной масс-спектрометрии (ТМС) для скрининга новорожденных и остается предметом дискуссии.

Для популяционного скрининга в дородовом периоде обычно используют два теста: хромосомный анализ у женщин старшего возраста и АФП сыворотки крови матери или тройной тест на ДНТ и хромосомные анеуплоидии.

Если беременность подвергается риску из-за ин-вазивной процедуры пренатальной диагностики хромосомной анеуплоидии вследствие возраста матери, также следует предложить дополнительное обследование, например определение уровня АФП в амниотической жидкости, полногеномную сравнительную гибридизацию для поиска опасных субмикроскопических делеций, скрининг мутаций муковисцидоза и других частых заболеваний.

На протяжении беременности женщине приходится сдавать множество лабораторных анализов, и после оценки результатов одного из них она может узнать о том, что у нее густая кровь. Опасно ли это состояние крови для будущей матери и ее малыша? Почему это произошло? Что делать? Можно ли обойтись без приема медикаментов? Все эти и многие другие вопросы непременно возникают у каждой женщины, столкнувшейся с такой проблемой, и в нашей статье мы ответим на каждый из них.

При выявлении густой крови будущей матери ни в коем случае не стоит впадать в панику. Зачастую такое состояние крови во время вынашивания ребенка не представляет опасности и легко корректируется, но иногда женщине будет нужно пройти курс лечения, который будет направлен на предотвращение определенных рисков.

Какие анализы крови могут указывать на сгущение крови?

При подозрении на повышение вязкости крови врач назначит анализ крови на свертываемость.

Причинами густой крови могут стать самые различные факторы и заболевания. В некоторых случаях женщина может даже не подозревать о них.

В большинстве случаев беременная узнает о том, что у нее густая кровь, на очередном приеме у врача после того, как она сдала общий анализ. Доктор обязательно заметит повышение уровня форменных элементов крови и гематокрита и сообщит об этом женщине. Иногда о густой крови беременная может узнать от лаборанта, который забирает кровь из вены и замечает, что она плохо всасывается в шприц, закупоривая просвет иглы. О таком явлении следует обязательно сообщить доктору.

При выявлении вышеописанных признаков густоты крови врач обязательно направит беременную на такой анализ, как коагулограмма. Именно этот метод исследования поможет более детально изучить состояние свертывающей системы крови и предопределит дальнейшую тактику диагностики и терапии.

Показатели коагулограммы определяют такие параметры крови:

фибриноген – норма 2-4 г/л, с увеличением срока беременности показатель возрастает до 6 г/л;
тромбиновое время – норма 11-18 с;
АЧТВ – норма 24-35 с, при возрастании фибриногена в связи с увеличением срока беременности этот показатель ускоряется до 17-20 с;
протромбин – норма 78-142 %;
волчаночный антикоагулянт – в норме отсутствует.

При повышенной густоте крови показатели коагулограммы изменяются следующим образом:

фибриноген – повышается;
тромбиновое время – ускоряется;
АЧТВ – ускоряется;
протромбин – повышается;
волчаночный антикоагулянт – присутствует.

Помните о том, что расшифровать результаты коагулограммы и оценить степень густоты крови может только специалист! Именно он сможет решить вопрос о целесообразности назначения медикаментозного лечения.

Опасна ли густая кровь при беременности для женщины и плода?

Выявив изменение густоты крови у беременной, доктор оценивает степень этих нарушений и определяет тактику ведения пациентки.

Именно по результатам коагулограммы специалист сможет определить степень опасности сгущения крови при беременности. В некоторых случаях, при незначительных изменениях показателей, врач не придает серьезного значения густоте крови и дает женщине общие рекомендации относительно диеты и потребления жидкости, направленные на устранение этого симптома. В таких ситуациях не следует волноваться, т. к. такое сгущение крови не несет угрозы ни будущей матери, ни плоду, а после родов показатели коагулограммы стабилизируются самостоятельно.

Иногда причиной сгущения крови во время беременности становится прием железосодержащих препаратов, которые назначаются при снижении уровня гемоглобина. Такой симптом тоже не должен вызывать волнение у женщины, т. к. после устранения анемии и отмены этих лекарственных средств состояние крови стабилизируется.

При более серьезных изменениях в показателях коагулограммы врач может рекомендовать беременной пройти курс терапии для разжижения крови. В таких ситуациях женщине также не следует волноваться, а просто выполнять все назначения врача. Опасность такого сгущения крови кроется в повышении риска образования тромбов и затрудненном токе крови по сосудам, но эту ситуацию можно исправить.

Замедленный ток вязкой крови по сосудам и более интенсивная нагрузка на сердце вызывает недостаточное поступление кислорода и питательных веществ во все ткани и органы. Это приводит к появлению таких симптомов у беременной:

постоянная вялость;
ухудшение памяти;
сонливость;
сухость во рту;
тяжесть в ногах;
похолодание конечностей.

При малоподвижном образе жизни и отсутствии лечения повышенная склонность к тромбообразованию может приводить к развитию таких осложнений у будущей матери:

тромбозы;
тромбофлебит;
ТЭЛА;
варикозная болезнь;
заболевания сердечно-сосудистой системы (инфаркт, гипертоническая болезнь, инсульт, атеросклероз).

Значительно повышенная густота крови негативно сказывается и на состоянии будущего малыша. В результате повышенного тромбобразования и замедленного тока крови со стороны плода могут наблюдаться такие нарушения:

выкидыш или преждевременные роды;
замершая беременность;
гипоксия;
задержка в развитии.

Именно в связи с вышеперечисленными возможными осложнениями густой крови женщинам, планирующим беременность, следует отказаться от зачатия до завершения курса терапии такого состояния. В ряде случаев это нарушение в свертывающей системе крови может быть опасным для жизни будущей матери и малыша, а во время вынашивания ребенка женщине можно принимать не все лекарственные препараты. Поэтому избавляться от этого симптома лучше до наступления беременности.

При планировании зачатия врач обязательно назначит проведение коагулограммы для исключения нарушений в свертывающей системе крови. Особенно актуально проведение такого исследования в определенных группах риска:

в анамнезе женщины были случаи выкидышей или замерших беременностей;
у женщины или ее родственников наблюдается варикозное расширение вен;
у близких родственников женщины были тромбозы, инфаркты или инсульты;
женщина профессионально занимается спортом, который связан с интенсивными физическими нагрузками.

Что делать при густой крови во время беременности?

При выявлении первых симптомов густой крови женщине необходимо рассказать о них врачу. Если же признаки сгущения крови были выявлены во время анализов, то доктор обязательно назначит беременной ряд дополнительных исследований для определения степени выраженности такого нарушения свертывающей системы и выяснения причин его возникновения. Спровоцировать сгущение крови могут самые различные заболевания и патологии: антифосфолипидный синдром, заболевания печени, патологии крови, гломерулонефрит, ревматизм, системная красная волчанка и др. Именно поэтому тактика дальнейшего обследования будет зависеть от каждого конкретного случая.

При отсутствии значительных нарушений в коагулограмме и заболеваний врач может рекомендовать женщине некоторые изменения в образе жизни и питания. К ним относят:

достаточное суточное потребление жидкости небольшими порциями (около 1,5 л, но дневная норма может изменяться при присутствии отеков и других заболеваний);
достаточная двигательная активность, которая способствует лучшей циркуляции крови;
регулярные прогулки на свежем воздухе, которые предупреждают кислородное голодание;
введение в ежедневный рацион продуктов, которые способствуют разжижению крови, и ограничение тех продуктов, которые вызывают ее сгущение;
ограничение соли.

Таким пациенткам врач обязательно назначит повторные анализы коагулограммы, один из которых будет проводиться через индивидуально определенный промежуток времени (для контроля эффективности профилактических мероприятий), а второй – за несколько недель перед родами.

При более выраженном сгущении крови беременной бывает недостаточно придерживаться вышеописанных рекомендаций. В таких случаях, помимо курса лечения основного заболевания, вызывавшего густоту крови, врач назначит женщине медикаментозную терапию.

Для разжижения крови могут назначаться такие препараты:

Длительность лечения, подбор дозы и препарата может выполняться только врачом, который учитывает общее состояние женщины и руководствуется показателями коагулограммы (первичной и повторных). На 36 неделе беременности или за 14 дней до предполагаемого родоразрешения все лекарственные средства отменяются, т. к. они могут стать причиной различных осложнений во время родов.

Несмотря на тот факт, что густая кровь обнаруживается у многих беременных, всем женщинам рекомендуется не только сохранять спокойствие, но и неукоснительно следовать рекомендациям врача. Такое нарушение свертывающей системы крови не всегда указывает на наличие значительного риска для будущей матери и плода, но в определенных случаях может приводить к развитию тяжелых последствий. Выполняя все назначения врача, женщина сможет предотвратить грозные осложнения и сохранит здоровье и жизнь себе и своему будущему малышу. Помните об этом! Не занимайтесь самолечением и будьте здоровы!

Почему болит сердце при беременности? Беременность вносит множество изменений в работу органов женщины, и сердце не является исключением. В большинстве случаев возникающие в нем боли не оп…

Почему низкое давление при беременности? Низкое давление при беременности (или гипотония беременных) наблюдается у многих женщин в первом триместре и является вариантом физиологической нормы….

Беременность и стеноз митрального клапана Во время беременности сердце транспортирует большее количество крови, т. к. при таком состоянии у женщины объем циркулирующей крови увеличивается на 3…

Высокое давление при беременности В течение беременности повышение артериального давления встречается у каждой десятой женщины. У каждой двадцатой пациентки гипертензия становится прич…

Диагностика вегето-сосудистой дистонии

1 Когда надо к врачу?
2 Методы диагностики ВСД
- 2.1 Первый прием
- 2.2 Сбор анамнеза и осмотр больного
- 2.3 Лабораторные анализы
- 2.4 Диагностические процедуры
  - 2.4.1 Проведение ЭКГ
  - 2.4.2 Эхокардиография (ЭхоКГ)
  - 2.4.3 Реоэнцефалография (РЭГ) сосудов головы
  - 2.4.4 Измерение сердечного ритма
  - 2.4.5 Магнитно-резонансный томограф (МРТ)
  - 2.4.6 Другие методы обследования
- 2.5 Дифференциальный анализ
3 Лечение ВСД

Точная диагностика ВСД базируется на комплексном исследовании организма. Диагностировать вегетативную дистонию - значит исключить наличие заболеваний, имеющих похожие симптомы. Лабораторные исследования крови, помощь дополнительных диагностических приборов (УЗИ, ЭКГ, МРТ), тщательный анализ, имеющихся в наличии хронических заболевани, й помогут лечащему врачу в диагностике.

Когда надо к врачу?

Вегетососудистая дистония отражает проблемы в работе центральной нервной системы. Вегетативная система в таких условиях не помогает адаптироваться организму к меняющимся факторам, а, наоборот, она заставляет организм функционировать в лихорадочном режиме. Случаются приступы панической атаки, сердце стучит с перебоями, возникает головокружение, появляются сердечные боли, спазмы сосудов головного мозга, возникают мигрени, происходят скачки давления в большую или меньшую сторону, нарушается циркуляция крови в органах. Все вышеперечисленное более чем весомый повод обратиться к врачу. Если результаты диагностики каждого органа не подтвердят его заболевание - это причина диагностировать ВСД.

Вернуться к оглавлению

Методы диагностики ВСД

Диагностику ВСД, позволяющую узнать о наличии патологии, проводят с помощью приборов, позволяющих исследовать электрофизиологическую работу сердечной мышцы (на ЭКГ), выявить функциональные изменения сердца и его клапанного аппарата (ЭхоКГ), оценить анатомические и функциональные особенности кровотока (МРТ), получить объективную оценку тонуса, эластичности стенок сосудов мозга, величину пульсового кровенаполнения (РЭГ). Лабораторные исследования крови включают в себя:

общий и биохимический анализ крови (показатели СОЭ, лейкоциты, гемоглобин);
содержание сахара в крови;
уровень тиреотропных гормонов щитовидной железы,

Вернуться к оглавлению

Первый прием

Если вовремя обратиться к врачу, можно избежать негативных последствий.

Перед первым приемом у врача необходимо накануне исключить прием алкоголя, кофе, воздержаться от диеты. Необходим полноценный отдых. Во время первого приема доктор на основе объективных жалоб пациента назначает дальнейшие исследования, которые подтвердят или опровергнут диагноз ВСД. Обращают внимание на тип сложения, так как астеническое (хрупкое) телосложение или, наоборот, излишнее ожирение, возможны при ВСД. Присутствуют ли симптомы нервного перенапряжения, стресса. Чем более подробными и честными будут ответы пациента, тем с большей вероятностью удастся поставить верный диагноз.

Вернуться к оглавлению

Сбор анамнеза и осмотр больного

Во время осмотра пациента отмечают тип сложения, состояние кожных покровов, измеряют температуру тела, отмечают насколько холодны конечности. Имеет ли место «мраморная» кожа, участки с нарушением кровоснабжения. Так как к причинам развития вегетососудистой дистонии относят влияние внешних факторов, доктор во время первичного осмотра, фиксирует:

наличие стрессовых ситуаций, было ли эмоциональное напряжение;
насколько правильный образ жизни ведет пациент (курение, злоупотребление алкоголем);
какие физические нагрузки получает;
какие травмы головы были в прошлом;
насколько полноценным есть период отдыха, достаточен ли он;
какие наследственные заболевания имеются в анамнезе.

Вернуться к оглавлению

Лабораторные анализы

Для полной картины болезни доктор назначит комплекс анализов.

Как правило, начинают с общих анализов крови и мочи, которые способны подтвердить или опровергнуть наличие определенного заболевания. Повышенный показатель СОЭ, лейкоцитов говорят о развитии в организме патологий, инфекционных, вирусных заболеваниях. Содержание в крови высокого уровня тиреотропных гормонов - признак заболеваний щитовидной железы - тиреотоксикоза. Биохимический анализ крови на содержание калия позволяет подтвердить или опровергнуть заболевание надпочечников - гиперальдостеронизм. Другое серьезное заболевание - феохромоцитома - определяется уровнем адренокортикотропных гормонов.

Вернуться к оглавлению

Диагностические процедуры

При вегето-сосудистой дистонии характер симптомов аналогичен другим заболеваниям. Для постановки диагноза необходима консультация не только терапевта, но и кардиолога, невропатолога, гастроэнтеролога, окулиста, гинеколога. Каждый врач дает направление на обследование работы определенного органа с помощью диагностических аппаратов.

Вернуться к оглавлению

Проведение ЭКГ

К недорогому, но ценному методу обследования относят электрокардиографию. Электрокардиограмма позволяет оценить физическое состояние сердца, показывает острое или хроническое повреждение миокарда, определяет частоту и регулярность сердечных сокращений. Расшифровывать ЭКГ должен врач-кардиолог.

Вернуться к оглавлению

Эхокардиография (ЭхоКГ)

Эхокардиография один из методов диагностики.

Эхокардиография как метод ультразвукового исследования позволяет вывести на экран изображение сердечной мышцы. Это дает возможность установить состояние мягких тканей и толщину стенок сердца, исследовать особенность движения крови в предсердиях и желудочках сердца. Показанием являются:

подозрения ИБС;
гипертония;
признаки сердечной недостаточности.

Вернуться к оглавлению

Реоэнцефалография (РЭГ) сосудов головы

Преимущество такого метода исследования - возможность получения сведений о состоянии артериальной и венозной систем мозга. Реоэнцефалография помогает диагностировать атеросклероз сосудов мозга, признаки нарушений проходимости магистральных сосудов, нарушения мозгового кровообращения. Эта процедура совершенно безболезненна, но эффективна.

Вернуться к оглавлению

Измерение сердечного ритма

Возбудимость ВНС приводит к нарушениям сердечного ритма. Частота пульса выходит за пределы 100 ударов в минуту, вызывая тахикардию, или становится меньше 60 ударов/минута, что говорит о брадикардии. Сердечно-сосудистые расстройства вызывают дыхательную аритмию - на вдохе частота пульса увеличивается, на выдохе - уменьшается. Измерять пульс необходимо на каждой руке в течение 1 минуты, обращая внимание на ритм ударов, их силу.

Вернуться к оглавлению

Магнитно-резонансный томограф (МРТ)

МРТ позволяет с помощью методики магнитно-резонансной ангиографии получить изображение просвета сосудов. Это дает представление об анатомических, функциональных особенностях кровотока. Метод МР-перфузии дает представление о проницаемости стенок сосудов, активности венозного потока, что позволяет определить здоровые и патологические измененные ткани мозга.

Вернуться к оглавлению

Другие методы обследования

Ультразвуковая диагностика позволяет проверить все внутренние органы.

Ультразвуковое обследование органов желудочно-кишечного тракта, сердца, мочеполовой системы позволяет диагностировать заболевания желудка, сердца, поджелудочной железы, почек. Для оценки деятельности вегетативной системы используют такие методические приемы, как определение индекса Кердо. Для этого нужны данные - частота пульса в минуту и показатель диастолического артериального давления. Значительное превышение нижнего АД над частотой пульса свидетельствует о преобладании симпатической системы в работе ВНС. Обратная картина говорит о преобладании парасимпатического отдела. В норме показатели нижнего АД и частота пульса не должны сильно отличаться друг от друга.

4, 1

1 ФГБУ «Медико-генетический научный центр» РАМН

2 ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет Минздрава России”

3 ГБУЗ "Краевая клиническая больница № 1 им. профессора С.В.Очаповского" департамента здравоохранения Краснодарского края

4 ФГБУ “Медико-генетический научный центр”

С целью обоснования внедрения массового обследования новорождённых на наследственные болезни обмена (НБО) методом тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) проведено ретроспективное исследование архивных образцов крови детей (n=86), умерших на первом году жизни. Изменения профилей аминокислот и ацилкарнитинов выявлены в 4 случаях (4,7 %). В одном из них обнаружено специфичное для болезни запаха мочи кленового сиропа многократное повышение концентрации лейцина, изолейцина и валина. Клиническая картина и обнаружение мутации в первом экзоне гена BCKDHB (с.98delG) в гетерозиготном состоянии косвенно подтвердили диагноз лейциноза. В остальных трех случаях выявленные изменения профиля аминокислот и ацилкарнитинов не носят такого же специфического характера. В этих случаях необходимы были бы повторные исследования крови методом МС/МС, дополнительные клинические и биохимические исследования. В результате проведенного исследования подтверждена необходимость внедрения метода МС/МС в программы неонатального скрининга на НБО для их своевременной диагностики и лечения.

ретроспективная диагностика

тандемная масс-спектрометрия

наследственные болезни обмена

1. Краснопольская К. Д. Наследственные болезни обмена веществ. Справочное пособие для врачей. - М.: РОО «Центр социальной адаптации и реабилитации детей «Фохат», 2005. - 364 с.

2. Михайлова С. В., Захарова Е. Ю., Петрухин А. С. Нейрометаболические заболевания у детей и подростков. Диагностика и подходы к лечению. - М.: «Литерра», 2011. - 352 с.

3. Chace H. D. Rapid diagnosis of MCAD deficiency quantitative analysis of octanoylcarnitine and other acylcarnitines in newborn blood spots by tandem mass spectrometry / Chace H. D., Hillman S. L., Van Hove J. L. et al. // Clinical Chemistry. - 1997. - V. 43. - № 11. - Р. 2106-2113.

4. Nyhan L. W., Barshop B. A., Ozand P. T. Atlas of metabolic diseases. - Second edition. - London: Hodder Arnold, 2005. - 788 p.

5. Rashed M. S. Clinical application of tandem mass spectrometry: ten years of diagnosis and screening for inherited metabolic diseases // J. of Chrom. B. - 2001. - V. 758. - № 27-48.

6. Sweetman L. Naming and counting disorders (counditions) included in newborn screening panels / Sweetman L., Millington D. S., Therrell B. L. et al. // Pediatrics. - 2006. - V. 117. - P. 308-314.

7. Van Hove J. L. Medium-chain acl-CoA dehydrogenase deficiency: diagnosis by acylcarnititne analysis in blood/Van Hove J. L., Zhang W., Kahler S. G. et al. // Am. J. Hum. Genet. - 1993. - V. 52. - P. 958-966.

Введение

На сегодняшний день известно более 500 нозологических формнаследственных болезней обмена (НБО). Основная часть НБО встречается крайне редко, но их суммарная частота в популяции составляет 1:1000-1:5000 . Как правило, НБО манифестируютна первом году жизни неспецифическими симптомами, клинически маскирующими их под другую, ненаследственную соматическую патологию. Вместе с тем, своевременная диагностика метаболических наследственных заболеваний важна, так как для многих из них разработаны и продолжают разрабатываться эффективные методы патогенетического лечения, без которого исход заболеваний зачастую остается фатальным. Общепризнано, что одним из наиболее оправданных и эффективных подходов к раннему выявлению наследственной патологии является неонатальный генетический скрининг. Развитие метода тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) с электроспрейной ионизацией сделало крупномасштабный масс-спектрометрический скрининг применимым в практике массового обследования на НБО к концу 90-х годов ХХ века. Этот высокочувствительный микрометод позволяет одновременно определять в нескольких микролитрах крови концентрации десятков аминокислот и ацилкарнитинов, имеющих значение для диагностики НБО. Эффективность лабораторного теста МС/МС позволила включить его в государственные программы неонатального скрининга новорожденных детей на аминоацидопатии, органические ацидурии и дефекты митохондриального β-окисления жирных кислот в ряде стран . Тем не менее, в Российской Федерации метод МС/МС не внедрен в систему массового обследования новорожденных детей и доступен для селективного скрининга на НБО только в единичных федеральных медицинских центрах.

Целью данного исследования явилось научное обоснование необходимости включения в региональные программы массового обследования новорожденных детей исследований методом МС/МС для диагностики аминоацидопатий, органических ацидурий и дефектов митохондриального β-окисления жирных кислот на основе проведения ретроспективного масс-спектрометрического анализа образцов крови больных детей, заболевания которых закончились летальным исходом на первом году жизни.

Пациенты и методы исследования

В настоящее ретроспективное исследование включены дети (n=86, соотношение мальчики:девочки 48/38), умершие на первом году жизни (в возрасте от 5 суток до 11 месяцев жизни) в течение одного календарного года (2010 год) на административной территории Краснодарского края. В исследование включены дети с врожденными пороками развития (n=29), инфекционными заболеваниями - пневмония, сепсис, бактериальный менингоэнцефалит (n=37), перинатальным поражением ЦНС (n=11), синдромом внезапной смерти (n=6) и иными заболеваниями (n=3). Контрольную группу составили 438 клинически здоровых новорожденных детей (227 девочек, 211 мальчиков) в возрасте 3-8 дней. В данной группе были определены референсные значения концентраций аминокислот и ацилкарнитинов в капиллярной крови у здоровых детей периода новорожденности.

Материалом для исследования послужили архивные образцы периферической крови на стандартных бумажных тест-бланках, полученные на 3-8 день жизни, для проведения стандартного неонатального скрининга. Концентрацию аминокислот и ацилкарнитинов (табл. 1) в крови определяли методом тандемной масс-спектрометрии (МС/МС) с помощью квадрупольного тандемного масс-спектрометра Agilent 6410 (AgilentTechnologies, США) по сертифицированной методике компании CHROMSYSTEM № V1 07 05 57136 001. Исследование было выполнено в лаборатории медицинской генетики ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский институт Минздрава России».

Таблица 1

Метаболиты, определяемые методом МС/МС

	Метаболит	Условное обозначение	Метаболит	Услов-ное обозна-чение
*А м и н о к и с л о т ы*
			3-метилкротонилкарнтин
	Аспарагиноваякислота		3-гидроксиизовалерилкарнитин
	Глутаминоваякислота		Гексаноилкарнитин
	Лейцин+изолейцин		Октаноилкарнитин
	Метионин		Октеноилкарнитин
	Фенилаланин		Деканоилкарнитин
			Деценоилкарнитин
			Додеканоилкарнитин
			Миристилкарнитин
	Цитруллин		Тетрадеценоилкарнитин
			Тетрадециноилкарнитин
			Гидроксимиристилкарнтин
*А ц и л к а р н и т и н ы*			Пальмитоилкарнитин
	Свободныйкарнитин		Гексадеценоилкарнитин
	Ацетилкарнитин		Гидроксигексадеценоилкарнитин
	Пропионилкарнитин		Гидроксипальмитоилкарнитин
	Малонилкарнитин		Стеароилкарнитин
	Бутирилкарнтин		Олеоилкарнитин
	Метилмалонилкарнитин		Гидроксистеароилкарнитин
	Изовалерилкарнтин		Гидроксиолеоилкарнитин
	Глутарилкарнитин		Гидроксилиноилкарнитин

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета прикладных программ Statistica 6,0 и электронных таблиц Excel 2007. Для определения описательных числовых характеристик переменных применялись стандартные методики статистического анализа: расчет медианы, 0,5 и 99,5 перцентилей.

Для подтверждающей молекулярно-генетической диагностики лейциноза проводили выделение ДНК из сухих пятен крови, используя набор реактивов DiatomDNAPrep (ООО «Биоком», Россия). Подбор праймеровдля ПЦР амплификации осуществляли для 10 экзонов генов BCKDHA и BCKDHB. Секвенирование ПЦР-фрагментов с целью выявления редких мутаций проводилось согласно протоколу фирмы-производителя на генетическом анализаторе ABIPrism 3500 (AppliedBiosystem, США).

Результаты исследования и их обсуждение

В результате исследования концентраций аминокислот и ацилкарнитинов в периферической крови 438 клинически здоровых новорожденных детей были определены 0,5 и 99,5 перцентиликонцентраций исследованных метаболитов, которые использовались нами в дальнейшем как референсные значения (табл. 2). Сопоставление концентраций аминокислот и ацилкарнитинов, определенных в образцах крови 86 умерших на первом году жизни детей, с референсными значениями концентраций, показало, что у 82 пациентов (95,3 %) ни один из исследуемых показателей не выходил за пределы 0,5 и 99,5 перцентилей контрольной группы, что позволило отказаться от рабочей версии о наличии у них нарушений обмена аминокислот и карнитинов, не верифицированных прижизненно. Однако у 4 детей (4,7 %) концентрации некоторых аминокислот и ацилкарнитиновв несколько раз превышали верхние границы референсного интервала контрольной группы (табл. 2).

Таблица 2

Результаты ретроспективной оценки концентраций аминокислот и ацилкарнитинов у новорожденных (n=4) с уровнем отдельных метаболитов вне диапазона 0,5-99,5 перцентилей

	Метаболиты	Концентрации отдельных метаболитов (мкмоль/л)
		Референсные значения контрольной группы (n= 438) в диапазоне 0,5-99,5 перцентилей	Индивидуальные значения пациентов (n=4) *
			Пациент 1	Пациент 2	Пациент 3	Пациент 4
*А м и н о к и с л о т ы*



			2503,868






						1457,474

*А ц и л к а р н и т и н ы*

* Примечание:

Пациент 1 - мальчик КМ (диагноз: обструктивный бронхиолит), умер в возрасте 11 месяцев;

Пациент 2 - мальчик КФ (диагноз: пневмония), умер в возрасте 1 месяца;

Пациент 3 - девочка ЛВ (диагноз: сепсис), умер в возрасте 12 суток.

Пациент 4 - девочка ПА (диагноз: пневмония), умерла в возрасте 6 суток.

В первом случае у пациента КМ, умершего в возрасте 11 месяцев, с диагнозом обструктивный бронхиолит, тандемная масс-спектрометрия аминокислот и ацилкарнитинов в архивных образцах крови выявила изменения содержания лейцина, изолейцина и валина, которые носят достаточно специфический характер, чтобы говорить о высокой вероятности врожденного метаболического дефекта в пути катаболизма лейцина и изолейцина. В исследованных архивных образцах крови обнаружено увеличение концентрации лейцина и изолейцина более чем в 9 раз и валина - более чем в 3 раза по сравнению с референсными значениями, что позволяет предположить диагноз «болезни с запахом мочи кленового сиропа» .

Из имеющихся клинических данных в пользу лейциноза у ребенка КМ свидетельствовали следующие клинические проявления: ранний отказ от естественного вскармливания, симптомы неонатальной энцефалопатии, нарастание неврологической симптоматики - изменения мышечного тонуса, судороги, эпилепсия, задержка психомоторного развития. У ребенка часто наблюдались инфекционные заболевания дыхательных путей с тяжелым течением, которые стали причиной облитерирующего бронхиолита, явившегося причиной летального исхода в возрасте 11 месяцев. Мы не обладаем информацией о том, был ли у ребенка специфический запах мочи, но увеличение концентрации типичных для лейциноза метаболитов и характерная клиническая симптоматика подтверждают наше предположение. Кроме того, в пользу диагноза болезни запаха мочи кленового сиропа свидетельствуют результаты проведенной ДНК диагностики лейциноза с использованием архивных образцов крови. Молекулярно-генетический анализ позволил выявить у ребенка делецию с.98delG в первом экзоне гена BCKDHB в гетерозиготном состоянии. Эта же мутация обнаружена в крови матери. Ввиду ограниченного количества архивных образцов крови ребенка и недоступности биологического материала его отца вторую мутацию обнаружить не удалось. Тем не менее, совокупность клинических, биохимических и молекулярно-генетических данных подтверждают диагноз лейциноза (или болезни с запахом мочи кленового сиропа, MIM ID 248600) в изученном случае.

В остальных трех случаях выявленные изменения профиля аминокислот и ацилкарнитинов не носят такого же специфического характера, как в предыдущем случае. Предполагать определенные НБО, основываясь на данных МС/МС,тем более - утверждать с достоверностью, в этих случаях невозможно. Для дифференциальной диагностики аминоацидопатий и органических ацидурий необходимы были бы повторные исследования крови методом МС/МС, дополнительные клинические и биохимические исследования.

Степень повышения специфичных для заболеваний метаболитов вариабельна и зависит от многих факторов. Характер питания ребенка, прием некоторых лекарственных препаратов должны учитываться при интерпретации результатов. Так, прием препаратов, содержащих вальпроевую кислоту или среднецепочечные триглицериды, приводит к повышению С6, С8 и С10, что затрудняет диагностику недостаточности среднецепочечной ацил-КоАдегидрогеназы. Прием карнитинсодержащих лекарственных препаратов также может приводить к повышению концентраций коротко- и среднецепочечных ацилкарнитинов. Содержание длинноцепочечных ацилкарнитинов в плазме и цельной крови различно, поскольку они ассоциированы с мембранами эритроцитов, следовательно, показатель гематокрита имеет определенное значение. За некоторым исключением, полутора - двукратное увеличение концентрации требует повторного анализа крови. Так, патогномоничные для пропионовой и изовалериановой ацидурии уровни метаболитов обычно повышаются более чем в 5 раз, а даже незначительное изменение концентрации глутарилкарнитина требует не только повторного анализа крови, но и дополнительного исследования органических кислот мочи, характерных для глутаровой ацидурии I типа .

Заключение

Проведенное методом МС/МС ретроспективное исследование образцов крови детей раннего возраста, умерших от различных причин, позволило предположить в ряде случаев наследственную патологию обмена веществ. В одном из них подтвержден диагноз болезни запах мочи кленового сиропа (лейциноз). Своевременные диагностические мероприятия в подобных случаях являются важной составляющей в дифференциальной диагностике врожденных ошибок метаболизма. Исследование концентраций аминокислот и ацилкарнитинов в образцах биологических жидкостей может иметь диагностическую ценность в анализе случаев младенческой смертности. Посмертно установленный диагноз наследственного заболевания обмена веществ у умершего ребенка является показанием для медико-генетического консультирования семьи. Необходимо широкое внедрение метода МС/МС в неонатальный скрининг как основного инструмента для выявления аминоацидопатий, органических ацидемий и дефектов β-митохондриального окисления жирных кислот у новорожденных для своевременной диагностики и лечения НБО.

Рецензенты :

Полевиченко Елена Владимировна, д-р мед. наук, профессор, главный научный сотрудник отдела реабилитации и медико-социальной помощи ФГБУ «ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии имени Дмитрия Рогачева» Минздрава России, г. Москва.

Михайлова Светлана Витальевна, д-р мед. наук, заведующая отделением медицинской генетики ФГБУ «Российская детская клиническая больница Минздрава России», г. Москва.

Библиографическая ссылка

Байдакова Г.В., Антонец А.В., Голихина Т.А., Матулевич С.А., Амелина С.С., Куцев С.И., Куцев С.И. РЕТРОСПЕКТИВНАЯ ДИАГНОСТИКА НАСЛЕДСТВЕННЫХ БОЛЕЗНЕЙ ОБМЕНА МЕТОДОМ ТАНДЕМНОЙ МАСС-СПЕКТРОМЕТРИИ // Современные проблемы науки и образования. – 2013. – № 2.;
URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=8953 (дата обращения: 12.12.2019). Предлагаем вашему вниманию журналы, издающиеся в издательстве «Академия Естествознания»

Описание

Подготовка

Показания

Интерпретация результатов

Документы к заполнению

Описание

Метод определения

Тандемная масс-спектрометрия с ионизацией в электроспрее.

Исследуемый материал Капиллярная кровь, собранная на специальную карточку-фильтр №903

Доступен выезд на дом

Анализ спектра аминокислот и ацилкарнитинов методом тандемной масс-спектрометрии (ТМС)

Что такое нарушения метаболизма? Наследственные нарушения метаболизма или по-другому обмена веществ - это около 500 различных заболеваний, которые обусловлены нарушением работы особых биохимических катализаторов - ферментов. Ферменты обеспечивают процессы расщепления аминокислот, органических кислот, жирных кислот и других биомолекул. Многие ошибочно считают, что поскольку заболевания этой группы встречаются крайне редко, то и исключать их нужно в последнюю очередь. Однако по данным литературы*, наследственными нарушениями метаболизма страдает один из 3000 новорождённых!

Особое место среди этих заболеваний занимают болезни, которые начинаются в раннем детском возрасте. Эти заболевания часто сочетаются с тяжёлой неонатальной патологией и/или протекают под маской таких состояний как сепсис, перинатальное поражение нервной системы, внутриутробная инфекция. Позднее выявление заболеваний этой группы может привести к тяжёлой инвалидности или даже летальному исходу. Установлено, что 5%** всех случаев «синдрома внезапной смерти младенцев» - следствие наследственных нарушений метаболизма. Однако некоторые из этих заболеваний эффективно лечатся при своевременной диагностике. Одним из современных методов диагностики нарушений метаболизма является тандемная масс-спектрометрия (ТМС). Этот метод позволяет определить в небольшом количестве биологического материала (капля высушенной крови) , что позволяет с определённой вероятностью заподозрить наследственное заболевание. В некоторых странах этим методом проводится обследование всех новорождённых на 10-30 наследственных нарушений метаболизма. Другими словами, все новорождённые подвергаются специальному биохимическому исследованию называемому скрининг. * Vilarinho L, Rocha H, Sousa C, Marcão A, Fonseca H, Bogas M, Osório RV. Four years of expanded newborn screening in Portugal with tandem mass spectrometry. J Inherit Metab Dis. 2010 Feb 23 ** Olpin SE The metabolic investigation of sudden infant death. Ann Clin Biochem, 2004, Jul 41 (Pt4), 282-293 **Opdal SH, Rognum TO The sudden Infant Death Syndrome Gene: Does It Exist? Pediatrics, 2004, V.114, N.4, pp. e506-e512 Что такое скрининг? Скрининг (от англ. Screening – просеивание) — это массовое обследование пациентов для выявления различных заболеваний, ранняя диагностика которых позволяет предотвратить развитие тяжёлых осложнений и инвалидности. На какие заболевания проводится обязательное скрининговое обследование новорождённых в нашей стране? В России существует государственная программа, которая включает в себя обязательное обследование (скрининг) всех новорождённых только на 5 наследственных заболеваний: фенилкетонурии (ФКУ), муковисцидоза, галактоземии, адреногенитального синдрома и врождённого гипотиреоза.

Обращаем Ваше внимание на то, что из этого перечня в состав исследования «ПЯТОЧКА» входит только скрининг на фенилкетонурию (полный перечень выявляемых наследственных болезней обмена веществ при помощи скринига «ПЯТОЧКА» см. ниже по тексту).

На какие заболевания можно обследовать ребёнка дополнительно? Скрининга новорождённых, направленного на диагностику нарушений метаболизма методом ТМС, в России на настоящий момент не проводится. В России это исследование пока проводится по назначению врача при наличии подозрений на наследственные болезни обмена веществ, хотя многие из заболеваний этой группы проявляют себя не сразу после рождения, но при этом уже есть у новорождённого. Однако, уже упомянутым ранее методом тандемной масс-спектрометрии (ТМС) можно дополнительно обследовать новорождённого ребенка на исключение 37 различных наследственных заболеваний, которые относятся к нарушениям обмена аминокислот, органических кислот и дефектам ß -окисления жирных кислот. Аминоацидопатии Аминоацидопатии развиваются вследствие недостатка специфических ферментов, необходимых для метаболизма аминокислот. Это приводит к аномально высокому уровню аминокислот и их производных в крови и моче, которые оказывают токсическое действие на клетки и ткани организма. Основные симптомы: задержка развития, судороги, коматозные состояния, рвота, диарея, необычный запах мочи, нарушения зрения и слуха. Лечение заключается в назначении специальной диеты и витаминов. Эффективность терапии зависит от того, насколько рано и точно установлен диагноз. К сожалению, некоторые заболевания из этой группы не поддаются лечению. Органические ацидурии/ацидемии Органические ацидурии/ацидемии являются результатом нарушения химического расщепления аминокислот вследствие недостаточной активности ферментов. Их клинические проявления схожи с проявлениями аминоацидопатий. Лечение заключается в назначении специальной диеты и/или витаминов. К сожалению, некоторые заболевания из этой группы не поддаются лечению. Дефекты ß-окисления жирных кислот ß-окисление жирных кислот – многоступенчатый процесс их расщепления, в результате которого образуется энергия, необходимая для жизнедеятельности клетки. Каждый шаг процесса окисления производится под действием специфических ферментов. При отсутствии одного из ферментов процесс нарушается. Симптомы: сонливость, кома, рвота, низкий уровень сахара в крови, поражение печени, сердца, мышц. Лечение заключается в назначении низкожировой диеты с частым и дробным кормлением, других специализированных диетических продуктов, а также, левокарнитина. Полный перечень выявляемых наследственных болезней обмена веществ

Болезнь с запахом кленового сиропа мочи (лейциноз).
Цитрулинемия тип 1, неонатальная цитрулинемия.
Аргининосукциновая ацидурия (АСА)/ недостаточность аргининосукцинат лиазы лиазы.
Недостаточность орнитин транскарбамилазы.
Недостаточность карбамилфосфат синтазы.
Недостаточность N-ацетилглютамат синтазы.
Некетотическая гиперглицинемия.
Тирозинемия тип 1.
Тирозинемия тип 2.
Гомоцистинурия/недостаточность цистатионин бета-синтетазы.
Фенилкетонурия.
Аргининемия/недостаточность аргиназы.
Пропионовая ацидемия (недостаточность пропионил КоА карбоксилазы).
Метилмалоновая ацидемия.
Изовалериановая ацидемия (недостаточность изовалерил КоА дегидрогеназы).
Недостаточность 2-метилбутирил КоА дегидрогеназы.
Недостаточность изобутирил КоА дегидрогеназы.
Глутаровая ацидемия тип 1 (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип 1).
Недостаточность 3-метилкротонил КоА карбоксилазы.
Множественная карбоксилазная недостаточность.
Недостаточность биотинидазы.
Малоновая ацидемия (недостаточность малонил КоА декарбоксилазы).
Недостаточность митохондриальной ацетоацетил КоА тиолазы.
Недостаточность 2-метил-3-гидроксибутирил КоА дегидрогеназы.
Недостаточность 3-гидрокси-3-метилглутарил КоА лиазы.
Недостаточность 3-метилглутаконил КоА гидратазы.
Недостаточность среднецепочечной ацил-КоА дегидрогеназы.
Недостаточность очень длинноцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы.
Недостаточность короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы.
Недостаточность длинноцепочечной 3-гидроксиацил-КоА дегидрогеназы (дефект трифункционального белка).
Глутаровая ацидемия тип II (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип II), множественная недостаточность ацил-КоА дегидрогеназ.
Нарушение транспорта карнитина.
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип I.
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип II.
Недостаточность карнитин/ацилкарнитин транслоказы.
Недостаточность 2,4-диеноил КоА редуктазы.
Недостаточность среднецепочечной 3-кетоацил-КоА тиолазы.
Недостаточность средне-/короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы.

Материал для исследования: капиллярная кровь, собранная на специальную карточку-фильтр №903.

Литература

Chace D.H., Kalas T.A., Naylor E.W. The application of tandem mass spectrometry to neonatal screening for inherited disorders of intermediary metabolism. Annu Rev Genomics Hum Genet. 2002; vol. 3; p. 17-45.
Leonard J.V., Dezateux C. Screening for inherited metabolic disease in newborn infants using tandem mass spectrometry. BMJ. 2002; vol. 324(7328); p. 4-5.
Millington D., Kodo N., Terada N., Roe D., Chace D. The analysis of diagnostic markers of genetic disorders in human blood and urine using tandem mass spectrometry with liquid secondary ion mass spectrometry.1991 Int.J.Mass Spectr.Ion Process. 111:211-28.
Chace D.H. Mass spectrometry in the clinical laboratory. Chem Rev. 2001 Feb;101(2):445-77.
Duran M., Ketting D., Dorland L., Wadman S.K. The identification of acylcarnitines by desorption chemical ionization mass spectrometry. J Inherit Metab Dis. 1985;8 Suppl 2:143-4.
Millington D.S., Kodo N., Norwood D.L., Roe C.R. Tandem mass spectrometry: a new method for acylcarnitine profiling with potential for neonatal screening for inborn errors of metabolism. J Inherit Metab Dis. 1990;13(3):321-4.
Chace D.H., DiPerna J.C., Mitchell B.L., Sgroi B., Hofman L.F., Naylor E.W.. Electrospray tandem mass spectrometry for analysis of acylcarnitines in dried postmortem blood specimens collected at autopsy from infants with unexplained cause of death. Clin Chem. 2001;47(7):1166-82.
Rashed M.S., Bucknall M.P., Little D., Awad A., Jacob M., Alamoudi M., Alwattar M., Ozand P.T. Screening blood spots for inborn errors of metabolism by electrospray tandem mass spectrometry with a microplate batch process and a computer algorithm for automated flagging of abnormal profiles. Clin Chem. 1997 Jul; 43(7):1129-41.
Millington D.S., Terada N., Chace D.H., Chen Y.T., Ding J.H., Kodo N., Roe C.R. The role of tandem mass spectrometry in the diagnosis of fatty acid oxidation disorders. Prog Clin Biol Res. 1992; 375:339-54.
Rashed M.S., Ozan P.T., Harrison M.E., Watkins P.J.F., Evans S. 1994. Electrospray tandem mass spectrometry in the analysis of organic acidemias. Rapid Commun. Mass Spectrom. 8:122-33
Vreken P., van Lint A.E., Bootsma A.H., Overmars H., Wanders R.J., van Gennip A.H. Rapid diagnosis of organic acidemias and fatty-acid oxidation defects by quantitative electrospray tandem-MS acyl-carnitine analysis in plasma. Adv Exp Med Biol. 1999; 466:327-37.
Griffiths W.J., Jonsson A..P, Liu S., Rai D.K., Wang Y. Electrospray and tandem mass spectrometry in biochemistry. Biochem J. 2001 May 1; 355(Pt 3):545-61.
Dooley K.C. Tandem mass spectrometry in the clinical chemistry laboratory. Clin Biochem. 2003 Sep; 36(6):471-81.
Михайлова С.В., Ильина Е.С., Захарова Е.Ю., Байдакова Г.В., Бембеева Р.Ц., Шехтер О.В., Захаров С.Ф. «Множественная карбоксилазная недостаточность, обусловленная мутациями в гене биотинидазы// Медицинская генетика. - 2005. - №2. - C. 633-638.
Байдакова Г.В., Букина А.М., Гончаров В.М., Шехтер О.В., Букина Т.М., Покровская А.Я., Захарова Е.Ю., Михайлова С.В., Федонюк И.Д., Колпакчи Л.М., Семыкина Л.И., Ильина Е.С. Диагностика наследственных болезней обмена веществ на основе сочетания методов тандемной масс-спектрометрии и энзимодиагностики, Медицинская генетика, 2005, т. 4, №1, с. 28-33.
Захарова Е.Ю., Ильина Е.С., Букина А.М., Букина Т.М., Захаров С.Ф., Михайлова С.Ф., Федонюк И.Д., Байдакова Г.В., Семыкина Л.И., Колпакчи Л.М., Зайцева М.Н. «Результаты проведения селективного скрининга на наследственные болезни обмена веществ среди пациентов психоневрологических отделений». Второй Всероссийский Конгресс, «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии», Материалы Конгресса, стр. 141-142.
Baidakova G.V., Boukina A.M., Boukina T.M., Shechter O.V., Michaylova S.V. I’lina E.S, Zakharova E.Yu Combination of tandem mass spectrometry and lysosomal enzymes analysis - effective tool for selective screening for IEM in neurological clinic. SSIEM 41st Annual Symposium, Amsterdam, August 31- September 3, 2004.
Mikhaylova S.V., Baydakova G.V., Zakharova E.Y., Il’ina E.S. First cases of biotinidase deficiency in Russia. European Journal of Human Genetics Vol.13-Supplement1-May, 2005, p. 386.
Байдакова Г.В., Захарова Е.Ю., Зинченко Р.А. Недостаточность среднецепочечной ацил-КоА-дегидрогеназы жирных кислот. Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков, Уфа, май 2005, Медицинская Генетика, т. 4, № 4, с. 153.
Захарова Е.Ю., Байдакова Г.В., Шехтер О.В., Ильина Е.С., Михайлова С.В. Тандемная масс-спектрометрия – новый подход диагностики наследственных нарушений обмена веществ, Материалы V съезда Российского общества медицинских генетиков, Уфа, май 2005, Медицинская Генетика, т. 4, №4, с.188.
Mikhaylova S.V., Zakharova E.Y, Baidakova G.V., Shehter O.V., Ilina E.S Clinical outcome of glutaric aciduria type I in Russia. J.Inherit. Metab.Dis 2007, v. 30, p. 38 22. Baydakova GV, Tsygankova PG. Diagnosis of mitochondrial β-oxidation defects in Russia. J Inherit Metab Dis (2008) 31 (Suppl 1) p.39

Подготовка

Что делать, если необходимо обследовать ребёнка на наследственные нарушения метаболизма?

По назначению врача или самостоятельно в любом медицинском офисе ИНВИТРО необходимо заранее приобрести набор для проведения исследования, в который входит:

Подготовка к исследованию и правила взятия крови у новорождённых

Взятие образцов крови у новорождённых детей осуществляется в родовспомогательных учреждениях специально подготовленным сотрудником, а в случае ранней выписки новорождённого (до 4 дня жизни) - специально подготовленной патронажной сестрой.
При обследовании новорождённых взятие пробы крови следует проводить не ранее 4-х суток у доношенных и 7-х суток у недоношенных детей. У новорождённых кровь берут из пяточки, у детей старше 3 мес - из пальца.
У новорождённых от начала полного грудного или искусственного вскармливания до взятия крови должно пройти не менее 4-х суток. Взятие крови проводят через 3 часа после кормления (у новорождённых - перед очередным кормлением).
Перед взятием крови у новорождённого стопу ребёнка необходимо тщательно вымыть мылом, протереть стерильным тампоном, смоченным 70% спиртом, а затем обработанное место промокнуть стерильной сухой салфеткой!
Прокол делают одноразовым стерильным скарификатором на глубину 2,0 мм (зоны прокола изображены на ). Первую каплю крови удаляют стерильным сухим тампоном.
Мягким надавливанием на пятку способствуют накоплению второй капли крови, к которой перпендикулярно прикладывают специальную карточку из фильтровальной бумаги и пропитывают полностью и насквозь 5 зон, очерченных круговой линией. Пятна крови должны быть не меньше указанного на бланке размера, вид пятен должен быть одинаков с обеих сторон , . Никогда не используйте противоположную сторону фильтровальной бумаги для заполнения окружностей.
После взятия крови осушите зону прокола стерильным тампоном и наклейте бактерицидный пластырь на участок прокола. Внимание! От качества взятия крови зависит точность и достоверность исследования!
Специальную карточку из фильтровальной бумаги высушивают не менее 2 - 4 часов при комнатной температуре. Избегайте попадания прямых солнечных лучей! Для этого отведите внешний клапан карточки и подведите его край под противоположную поверхность фильтра (где не обозначены окружности), . После полного высыхания капель крови переместите клапан карточки над поверхностью фильтра. Подпишите Фамилию И. О. ребёнка внизу карточки (Name) и укажите дату взятия крови (Date), . Карточку поместите в маленький конверт и вложите его в предварительно подписанный большой конверт. Заполните направительный бланк заказа и также вложите его в большой конверт.
Передайте большой конверт в ближайший медицинский офис ИНВИТРО (конверт не запечатывается). Сотрудник ИНВИТРО в вашем присутствии проверит содержимое конверта и правильность заполнения бланка заказа.

Хранение и транспортировка: до и после взятия крови набор хранить при комнатной температуре в сухом месте; избегать контакта с системами отопления; избегать попадания прямых солнечных лучей; при транспортировке упаковать набор (наборы) в полиэтиленовый герметично закрывающийся пакет.

Показания к назначению

Сходные случаи заболевания в семье.
Случаи внезапной смерти ребёнка в раннем возрасте в семье.
Резкое ухудшение состояния ребёнка после кратковременного периода нормального развития (бессимптомный промежуток может составлять от нескольких часов до нескольких недель).
Необычный запах тела и/или мочи («сладкий», «мышиный», «варёной капусты», «потных ног» и др.).
Неврологические нарушения - нарушения сознания (летаргия, кома), различные типы судорожных приступов, изменение мышечного тонуса (мышечная гипотония или спастический тетрапарез).
Нарушения ритма дыхания (брадипноэ, тахипноэ, апноэ).
Нарушения со стороны других органов и систем (поражение печени, гепатоспленомегалия, кардиомиопатия, ретинопатия).
Изменения лабораторных показателей крови и мочи - нейтропения, анемия, метаболический ацидоз/алкалоз, гипогликемия/гипергликемия, повышение активности печёночных ферментов и уровня креатинфосфокиназы, кетонурия.
Дополнительная диагностика 37 наследственных болезней обмена веществ наряду с обязательной государственной программой выявления 5-ти наследственных заболеваний: скрининг новорождённых: «ПЯТОЧКА».

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Единицы измерения в лаборатории ИНВИТРО: мкмоль/литр. Референсные значения для определяемых параметров (детализированная интерпретация результатов)

Общая интерпретация результата

Наследственные заболевания обмена веществ	Изменение концентрации метаболитов
Болезнь «с запахом кленового сиропа мочи» (лейциноз)	Лейцин Валин
Цитрулинемия тип 1, неонатальная цитрулинемия	Цитрулин
Аргининосукциновая ацидурия (АСА)/ недостаточность аргининосукцинат лиазы лиазы	Цитрулин
Недостаточность орнитин транскарбамилазы	Цитрулин
Недостаточность карбамилфосфат синтазы	Цитрулин
Недостаточность N-ацетилглютамат синтазы	Цитрулин
Некетотическая гиперглицинемия	Глицин
Тирозинемия тип 1	Тирозин
Тирозинемия тип 2	Тирозин
Гомоцистинурия/недостаточность цистатионин бета-синтетазы	Метионин
Фенилкетонурия	Фенилаланин
Аргининемия/недостаточность аргиназы	Аргинин
Пропионовая ацидемия (недостаточность пропионил КоА карбоксилазы)	С3
Метилмалоновая ацидемия	С3 (С4DC )
Изовалериановая ацидемия (недостаточность изовалерил КоА дегидрогеназы)	С5
Недостаточность 2-метилбутирил КоА дегидрогеназы	С5
Недостаточность изобутирил КоА дегидрогеназы	С4
Глутаровая ацидемия тип 1 (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип 1)	С5DC
Недостаточность 3-метилкротонил КоА карбоксилазы	С5ОН
Множественная карбоксилазная недостаточность	С5ОН С3
Недостаточность биотинидазы	С5ОН
Малоновая ацидемия (недостаточность малонил КоА декарбоксилазы)	С3DC
Недостаточность митохондриальной ацетоацетил КоА тиолазы	С5:1 С5ОН
Недостаточность 2-метил-3-гидроксибутирил КоА дегидрогеназы	С5:1 С5ОН
Недостаточность 3-гидрокси-3-метилглутарил КоА лиазы	С5ОН С6DC
Недостаточность 3-метилглутаконил КоА гидратазы	С6DC
Недостаточность среднецепочечной ацил-КоА дегидрогеназы	С6 С8 С10 С10:1
Недостаточность очень длинноцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы	С14 С14:1 С14:2 С16:1
Недостаточность короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы	С4
Недостаточность длинноцепочечной 3-гидроксиацил-КоА дегидрогеназы (дефект трифункционального белка)	С16OH С18ОН С18:1OH С18:2OH
Глутаровая ацидемия тип II (недостаточность глутарил КоА дегидрогеназы тип II), множественная недостаточность ацил-КоА дегидрогеназ	С4 С5 С6 С8 С10 С12 С14 С16 С18
Нарушение транспорта карнитина	C0 ↓ тотальное снижение ацилкарнитинов
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип I	С0 С16 ↓ С18:1 ↓ С18:2 ↓
Недостаточность карнитин палмитоил трансферазы тип II	C0 ↓ С16 С18:1 С18:2
Недостаточность карнитин/ацилкарнитин транслоказы	C0 ↓ С16 С18:1 С18:2
Недостаточность 2,4-диеноил КоА редуктазы	С10:2
Недостаточность среднецепочечной 3-кетоацил-КоА тиолазы	С6DC С8DC
недостаточность средне-/короткоцепочечной ацил-КоА дегидрогеназы	С4ОН С6ОН

Что делать, если в результате исследования выявлено изменение показателей? Необходимо понимать, что изменения, выявленные при ТМС, полностью не подтверждают заболевание, а в ряде случаев, необходимо пройти дополнительные тесты, (см. список дополнительных тестов и ) чтобы убедиться в достоверности выявленных нарушений. Рекомендуется консультация врача-генетика и педиатра, чтобы выработать тактику совместных действий. Используемая литература (референсные значения)

Wiley V., Carpenter K., Wilcken B. Newborn screening with tandem mass spectrometry: 12 months’ experience in NSW Australia. Acta Paediatrica 1999; 88 (Suppl):48-51.
Rashed MS, Rahbeeni Z, Ozand PT. Application of electrospray tandem mass spectrometry to neonatal screening. Semin Perinatol 1999; 23:183–93.
Schulze A., Lindner M., Kohlmüller D., Olgemöller K., Mayatepek E., Hoffmann G.F. Expanded Newborn Screening for Inborn Errors of Metabolism by Electrospray Ionization-Tandem Mass Spectrometry: Results, Outcome, and Implications, Pediatrics, 2003; 111; 1399-1406.
Hoffman G., Litsheim T., Laessig R. Implementation of tandem mass spectrometry in Wisconsin’s newborn screening program. MMWR Morb MortalWkly Rep 2001; 50 (RR-3): 26–7.
Lin W.D., Wu J.Y., Lai C.C., Tsai F.J., Tsai C.H., Lin S.P., Niu D.M. A pilot study of neonatal screening by electrospray ionization tandem mass spectrometry in Taiwan. Acta Paediatr Taiwan 2001; 42:224–30.
Zytkovicz T.H., Fitzgerald E.F., Marsden D., Larson C.A., Shih V.E., Johnson D.M., et al. Tandem mass spectrometric analysis for amino, organic, and fatty acid disorders in newborn dried blood spots: a two year summary from the New England Newborn Screening Program. Clin Chem 2001;47:1945–55.